400-655-1678
快速簡易大腸桿菌基因敲除工具包
用于大腸桿菌染色體上基因的快速敲除或改造
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特點
準確Red/ET重組
快速、精確
可以多次敲除
重組質粒易于消除
應用
本工具包用于在一周內敲除或改造大腸桿菌染色體上的基因。
大腸桿菌染色體上的基因靶向斷裂
1.轉化
待改造大腸桿菌株被表達質粒pRedET轉化。
2. Red/ET重組
Red/ET表達通過添加阿拉伯糖和溫度變化而誘發。包含50 bp同源臂的FRT-PGK-gb2-neo-FRT盒被轉化。Red/ET介導重組通過插入盒，破壞目標基因座。
3. 可選：消除篩選標記
Flp介導切除，留下單個FRT點。（另見“FRT選擇標記盒”與“Flp表達質粒及菌株）
說明
Red/ET重組可以促成遺傳信息以精確、明確、可靠的堿基對方式交換。FRT側卡那霉素抗性標記盒可以使用工具包替換大腸桿菌染色體上的基因。Red/ET重組可以替換大腸桿菌染色體上30kb的片段。
使用FRT側卡那霉素抗性盒對目標基因進行替換，在必要的情況下，可以利用FLP重組酶促成隨后對選擇標記的消除。FLP表達質?？梢詮幕驑蚬举彽?。
多次敲除可以通過重復插入工具包提供的功能盒或基因橋公司提供的其他功能盒完成。
由于pRedET 表達質粒的優化設計，重組過程是嚴格控制的。重組蛋白的基因受控于誘導型啟動子，質粒攜帶溫度敏感型復制起點，方便重組后的質粒消除。
目錄
兩個Red/ET重組蛋白表達質粒pRedET(tet)和pRedET(amp)。所有大腸桿菌株都可以利用這些質粒轉化進行Red/ET重組。
FRT側卡那霉素抗性模板（FRT-PGK-gb2-neo-FRT）可用于您自己的實驗。
陽性對照可以替換大腸桿菌染色體上轉運蛋白（manX）的基因。
詳細操作指南，質粒、遺傳圖、序列的說明。
序列
FRT-PGK-gb2-neo-FRT
FRT-PGK-gb2-neo-FRT
