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gene bridges快速簡易條件式敲除工具包 - loxP

更新時間:2013-03-28 09:29:44點擊次數:3837次字號:T|T
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快速簡易條件式敲除工具包 - loxP

用于將loxP位點快速、方便地融入任意目標位置的大型載體質粒(產生轉基因小鼠基因模型)

手冊[PDF]      聯系技術支持            訂單       序列

應用

          本工具包用于在2-4周內將loxP位點融入任意目標位置的載體質粒,無需使用限制性酶

產生基于loxP位點的條件式敲除構筑

1.含目的基因的克隆
使用BAC亞克隆工具包,通過Red/ET重組將目的基因(橙色)從BAC中亞克隆至極小載體。

2. Red/ET重組

要插入單個loxP位點,在目標位置利用Red/ET重組及快速簡易條件式敲除工具包loxP,引入一個loxP-PGK-gb2-neo-loxP盒(含通過PCR擴增添加的50bp同源臂)。

3. Cre介導切除
Cre
介導切除留下單個loxP位點。(另見“loxP選擇盒”及“Cre表達質粒及菌株”)。

4. Red/ET重組
在目標位置通過Red/ET重組,使用快速簡易條件式敲除工具包loxP,引入另一個含通過PCR擴增添加的50bp同源臂的loxP-PGK-gb2-neo-loxP盒,產生所需打靶載體。

說明

內含loxP-PGK-gb2-neo-loxP盒可實現原核及真核細胞中的新霉素/卡那霉素選擇。它結合了一個用于大腸桿菌中卡那霉素抗性表達的原核啟動子(gb2)和一個用于哺乳動物細胞中新霉素抗性表達的真核啟動子(PGK)。內含706-Cre表達質??蓪崿F大腸桿菌中的Cre重組。本工具包也可以用于操作細菌人造染色體。Red/ET效率高,重組完成后,Red/ET重組蛋白表達質粒pRedET易于消除。

目錄

          Red/ET重組蛋白表達質粒pRedET。通過該質粒轉化,任意大腸桿菌株都可作為Red/ET專用。

          用于您自己實驗的loxP-PGK-gb2-neo-loxP模板

          陽性對照,在18kb高拷貝質粒中引入loxP位點

          詳細操作指南,質粒、遺傳圖、序列的說明

           

序列

loxP-PGK-gb2-neo-loxP

loxP-PGK-gb2-neo-loxP

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