400-655-1678
反選擇BAC修飾工具包
使用反選擇盒進行高級BAC修飾，同樣適用于細菌染色體。
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特點
快速BAC修飾（2-3周）
高效Red/ET重組
Red/ET質粒易于消除
效率遠高于pScB-neo系統
應用
片段交換
無需留下選擇標記或任意多余序列，即可進行標記插入和刪除。
引入短序列，如點突變、loxP位點、限制性位點等。
同樣適用于細菌染色體修飾及普通ColE 1起點質粒
1. Red/ET轉化BAC宿主
第一步，Red/ET質粒pSC101-BAD-gbaA轉入含BAC的大腸桿菌宿主。
2.Red/ET第一步
通過添加阿拉伯糖，保持溫度變化在30°C至37°C之間，可誘導介導Red/ET的基因表達。誘導后，細胞為電穿孔做好準備，添加同源臂的PCR產品（rpsL-neo PCR產品反選擇/選擇盒）電穿孔。
3.修飾后BAC DNA的選擇及提取
選擇攜帶修飾后BAC的克隆。只有攜帶修飾成功的BAC的克隆才能通過瓊脂板上的卡那霉素選擇。之后進行DNA微量制備，用于確認反選擇/選擇盒的成功融合。
4. Red/ET第二步
通過添加阿拉伯糖，保持溫度變化在30°C至37°C之間，可誘導介導Red/ET的基因表達。誘導后，細胞為電穿孔做好準備。非選擇DNA既可以是含選擇盒左右同源臂及點突變的寡核苷酸（對照反應），也可以是側帶同源臂的基因，將被電穿孔。rpsL-neo反選擇/選擇盒將被非選擇DNA替換。
5.無反選擇/選擇盒的選擇
只有選擇/反選擇盒被非選擇DNA片段替換的克隆才會在鏈霉素板上生長。隨后DNA微量制備，用于確認反選擇/選擇盒的成功融合。
說明
這是基于鏈霉素選擇的新版反選擇盒pRpsL-neo。本工具包用于在2-3周內使用反選擇盒修飾任意類型的細菌人造染色體（BAC）。內含反選擇盒pRpsL-neo基于鏈霉素選擇，表現出遠高于pSacB-neo或其他可比系統的效率。
工具包也可用于操作細菌染色體核普通ColE 1起點質粒。本工具包Red/ET效率高，重組完成后Red/ET重組蛋白表達質粒pRedET易于消除。
目錄
Red/ET重組蛋白表達質粒pRedET。通過該質粒轉化，任意大腸桿菌株都可作為Red/ET專用
已攜帶Red/ET質粒的BAC宿主大腸桿菌株DH10B
用于您自己實驗的pRpsL-新霉素模板
陽性對照，在150kb BAC中引入點突變
詳細操作指南，質粒、遺傳圖、序列說明
序列
rpsL-kanR/neoR selection cassette選擇盒
rpsL-kanR/neoR選擇盒
