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免疫組織化學問題解答

更新時間:2013-01-22 09:35:51點擊次數:2654次字號:T|T
免疫組織化學是一種什么方法? 免疫組織化學方法是一種把分子水平的物質準確具體表達出來的一種方法,這些分子水平的物質可能 與癌細胞,細菌,病毒等等有關。自從成功地制作出這些特異性的抗體,使組織結構可以從分子水平中顯 示出來,這些特異性抗體可以與腫瘤細胞中特定的結構結合,這些抗體被稱為單克隆抗體。把這些單克隆 抗體孵育在組織切片上,與特定的靶細胞進行特異的反應。如單克隆抗體可以與癌細胞發生特異性反應, 單克...
免疫組織化學是一種什么方法?
免疫組織化學方法是一種把分子水平的物質準確具體表達出來的一種方法,這些分子水平的物質可能
與癌細胞,細菌,病毒等等有關。自從成功地制作出這些特異性的抗體,使組織結構可以從分子水平中顯
示出來,這些特異性抗體可以與腫瘤細胞中特定的結構結合,這些抗體被稱為單克隆抗體。把這些單克隆
抗體孵育在組織切片上,與特定的靶細胞進行特異的反應。如單克隆抗體可以與癌細胞發生特異性反應,
單克隆抗體可以從特定的腫瘤病人血細胞中獲得。在組織切片中結合的抗體可以用棕色或紅色顯示出來。
比如,對轉移到骨組織中的腫瘤細胞進行標記實驗,我們可以用前列腺特異性抗體進行標記,如顯示出棕
色或紅色的陽性反應,我們可以明確地判斷這個轉移性腫瘤來自前列腺癌,有些轉移的腫瘤距原發部位可
能更遠。免疫組織化學不僅能幫助準確地診斷出腫瘤的性質,還可以預測腫瘤預后的生物學行為。例如,
我們可以知道所有組織細胞的增殖活性。這不是更有意義的實驗嗎?我們能夠判定在一種腫瘤組織中,80%
的細胞增殖抑制了其他 10%的腫瘤細胞的增殖,我們可以判定出這種腫瘤細胞增殖率高,要比其他腫瘤生
長迅速,進展快。
在其他方面,免疫組織化學染色可以指導某些腫瘤的化療,如:可以測定女性乳腺癌細胞中攜帶雌激
素受體的含量。如果癌細胞中雌激素表達陽性,病人可以進行三苯氧胺的治療,雌激素能夠促進乳腺癌細
胞的生長,三苯氧胺有封閉癌細胞中雌激素受體的功能。在此過程中,攜帶雌激素受體的癌細胞是通過激
素促進它生長的,而且,癌細胞增生可以通過三苯氧胺治療來阻止其生長的。因此,免疫組織化學測定雌
激素受體的表達情況,可以預測三苯氧胺治療的意義。這僅僅是免疫組織化學應用中的一個小例子。免疫
組織化學在確定組織起源中的應用前景是無限的。免疫組化技術是一個復雜的生物技術,對每一個抗體標
記物都有獨自特定的染色方法,目的是能夠明確各種組織起源,判定組織中是否存在特異抗原。
病理醫生是如何對癌癥做出診斷的?
癌癥病人就診時,外科醫生會在腫瘤部位取一小塊組織,送給病理科醫生。在病理科,送檢的組織經
過石蠟包埋,制作成非常薄的組織切片,切片再進行 HE 染色,然后病理科醫生將切片放在顯微鏡下觀察,
觀察送檢的標本中有沒有腫瘤細胞,并做出診斷是患何種腫瘤。不幸的是,許多腫瘤組織細胞在顯微鏡下
看起來非常相似,以致于病理醫生難以完全準確地判斷出腫瘤的性質。在許多腫瘤病例中,鑒別診斷是非
常困難的,因為只有明確了腫瘤的性質,醫生才能針對每種腫瘤制定出最有效的治療方案,目前已經從分
子水平研究出腫瘤細胞的表面和細胞內有特異性的物質表達。過去在傳統的光學顯微鏡下及電鏡下所看到
的組織切片中的結構,曾經幻想的分子水平的結構,已經有現代免疫組織化學技術證明,這個技術的整個
過程就叫做免疫組織化學方法。
CD 抗原
CD,即分化叢(clusters of differentiation)。第Ⅳ屆國際免疫學會議命名委員會(1983,京都),
根據 T 細胞表面的分化抗原存在叢集現象,將這種抗原命名為 CD 抗原。CD 抗原不僅存在于 T 細胞,也存
在于 B 細胞,巨噬細胞等。
交叉反應指抗體除與其相應的抗原發生特異性反應外還與其它抗原發生反應。產生的原因有以下幾個方面:
1. 抗原特異性。指用于免疫動物的抗原性物質中含有多種抗原分子,它引起動物產生針對多種抗原分子
特異性的相應抗體。任何其它物質只要含有一種或多種與上述物質相同的抗原分子,必將與上述多特異性
的抗血清發生交叉反應。
2. 共同決定簇。即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇。
3. 決定簇相似,兩種不同的抗原決定簇,如果結構大致相同,由于空間構象關系,某一決定簇的相應抗
體可以與大致相同的決定簇發生交叉反應。當然抗原一抗體之間構象相似時的結合力小于吻合時的結合力。
? 抗原決定簇。它是指在抗原分子上為免疫系統識別和作用的基團,是抗原的關鍵結構??乖瓫Q定
簇的種類有 10
16
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18種之多。決定簇的數目稱為決定簇的價數,較大的分子決定簇較多,
如紅細胞上的 A 或 B 血型抗原,其決定簇數目可能超過 100 萬。
? 多抗和單抗特性比較
1. 均一性。一種單抗中,每個抗體的化學結構和氨基酸順序都相同,只有一種 Ig 亞類。即
單抗是一種純度很高的均一抗體。而從不同動物,不同時期所得到的多抗,各有不同的
化學組成。多抗是多種種類和亞類 Ig 的混合物。
2. 穩定性。單抗的穩定較差,對 PH 變化敏感,對熱不穩定,提純過程中易變性,而多抗
的穩定性則較好。
3. 特異性。單抗是單一地針對抗原的某一決定簇,所以用它進行血清學反應時,特異性強,
敏感性高,一般不發生交叉反應。而多抗能與抗原上的多種抗原決定簇結合,所以特異
性較差,較易引起交叉反應。
4. 重復性。單抗的重復性好,而多抗每批都不一樣。
沉淀反應
多抗由于與抗原多價結合容易形成網絡樣沉淀,而單抗只與抗原結合產生二聚體,不能直接形成抗原
抗體沉淀物。
抗體的保存
抗體儲存容器應由不吸附蛋白質的材料制成,常用的有聚丙烯,聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如儲存的抗
體中蛋白濃度很低(10-100Mg/L),就應另加隔離蛋白以減少容器對抗體蛋白的吸附,隔離蛋白常用
0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。
絕大多數已稀釋的抗體應存在 4℃-8℃條件下,以免凍融對抗體蛋白產生有害效應??贵w原液和已分
離的免疫球蛋白組分應保存于-20℃條件下,并避免反復凍融。冷凍的抗體溶液應置于室溫中緩慢地解凍,
應絕對避免用高溫快速解凍。
被細菌污染的抗體常會出現假陽性結果,應將污染的抗體溶液及其他試劑棄之。為防止細菌污染,可
于抗體溶液中加入 0.01%疊氮鈉??贵w經真空冷凍干燥后置-20℃以下可保存 3-5 年。
保存稀釋后的單抗應加入 0.1%疊氮鈉濃度。大多數稀釋抗體可進行冷凍保存,少數抗體可能會丟失抗
原活性。大多數單抗,只要蛋白濃度適當,可在 4℃下保存數月。病理科成立免疫組化室需要哪些小設備(儀器)
1. 冰箱(4℃、-18℃):貯存免疫試劑用。
2. 18cm 不銹鋼高壓鍋+電爐或家用微波爐。(抗原修復用)
3. 孵育盒(有機材料);不銹鋼或塑料耐高溫切片架。
4. 沖洗瓶兩個,定時器一個,10ml 玻璃試管五個,塑料試管架。
5. 1000ul 國產移液器兩支,200ul 進口移液器一支,20ul 進口移液器一支,相應吸嘴。
6.磨砂玻片。
7. PAP 油筆。
如何應用免疫組化進行病理科研設計?
科研課題的基本要求至少有四個,即創新性、科學性、可行性和推廣應用性。關于創新性的重要性很
好理解,誰喜歡東施效顰、拾人牙慧、人云亦云的文章?誰不想標新立異,“國內外尚無類似報道”?可
對于病理科醫生尤其是基層病理科醫生,采用免疫組化技術進行創新性的科研,似乎免為其難。其實如果
調整一下思維角度,難者也就不難了。我們在這里甘冒才疏學淺之嫌,介紹幾種簡單可行的創新性方法,
以請教于病理界同仁。
方法之一,采用新抗體,這是最簡單的辦法。如金屬蛋白酶 MMP-9 抗體是一種新抗體,其抗原 MMP-9 與腫
瘤侵襲和轉移有密切關系,但采用此抗體和免疫組化研究腫瘤侵襲、轉移的文章國外少見,國內尚無,讀
者不妨一試。
方法之二,舊抗體新用途。比如關于凋亡及其相關因子表達與腫瘤發生發展的關系的研究,國內外有大量
報道,而關于其非腫瘤疾病的關系的研究,卻報道很少,有的甚至迄今未見報道。如果你將 P53、bcl-2、
c-myc、Bax、ICE 等凋亡相關基因蛋白抗體用于非腫瘤性疾病研究,一定會獲得新發現。再比如,P-糖蛋
白抗體絕大多數用于腫瘤耐藥性研究,卻極少用于非腫瘤性疾病的研究。正常肝、腸道、腎等均表達 P-糖
蛋白,在非腫瘤性疾病時這種表達有什么改變,這種改變又有什么意義,迄今尚未了解,讀者也不妨在這
方面施展你的身手。
方法之三,同時應用多種抗體進行普通免疫染色或雙重免疫染色研究二種或二種以上抗原的協同表達,只
要這幾種抗體選用合理,也比較容易獲得新發現。
評價某種免疫學試驗質量的指標
1. 診斷敏感性。指患者中因此試驗得到陽性結果的百分率。計算方法:TP/(TP+FN)χ100%。理想試驗
的診斷敏感性為 100%。
2. 診斷特異性。指正常人與無關疾病的患者中因此試驗得到陰性結果的百分率。非患者的陰性結果為真
陰性,其陽性結果為假陽性。計算方法:TN/(TN+FP)χ100%。理想試驗的診斷特異性應為 100%。3. 診斷指數。為評價某種試驗敏感性與特異性的綜合指標。理想的指數應為 200%,≤100%的試驗不能成
立。
4. 診斷效率。某種試驗能準確區分患者和非患者的能力。計算方法:(TP+TN)/(TP+FP+TN+FN)×100%。
理想試驗的診斷效率應為 100%。
5. 陽性預測值。指在所有陽性結果的人中,非患者的百分率,計算方法:TP/(TP+FP)×100%。理想試
驗的陽性預測值應為 100%。
6. 陰性預測值。指在所有陰性結果的人中,非患者的百分率,計算方法:TN/(TN+FN)×100%。理想
試驗的陰性預測值應為 100%。
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