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細胞免疫化學:免疫酶標技術

更新時間:2013-01-22 09:33:07點擊次數:2709次字號:T|T
1) 直接法 1.標本固定。 2.PBS 洗滌 2×3 分鐘。 3.1% H2O2(或 1% H2O2 甲醇)抑制內源性過氧化物,室溫 10~20 分鐘。 4.正常血清(1:10)孵育,室溫 20 分鐘。 5.滴加酶標記的抗體 37℃1 小時或 4℃過夜。 6.PBS 洗滌 3×3 分鐘。 7.DAB+H2O2顯色 5~10 分鐘,鏡下控制染色結果。DAB+H2O2應用前 15 分鐘配制。 8.充分水洗后,復染、脫水、透明、封片、鏡檢。 2) 間接法 1.標本固定。 2.P...
1) 直接法
1.標本固定。
2.PBS 洗滌 2×3 分鐘。
3.1% H2O2(或 1% H2O2 甲醇)抑制內源性過氧化物,室溫 10~20 分鐘。
4.正常血清(1:10)孵育,室溫 20 分鐘。
5.滴加酶標記的抗體 37℃1 小時或 4℃過夜。
6.PBS 洗滌 3×3 分鐘。
7.DAB+H2O2顯色 5~10 分鐘,鏡下控制染色結果。DAB+H2O2應用前 15 分鐘配制。
8.充分水洗后,復染、脫水、透明、封片、鏡檢。
2) 間接法
1.標本固定。
2.PBS 洗滌 2×3 分鐘。
3.1%H2O2(或 1%H2O2 甲醇)抑制內源性過氧化物,室溫 10~20 分鐘。
4.正常血清(1:10)孵育,室溫 20 分鐘。
5.滴加第一抗體,37℃1 小時或 4℃過夜。
6.PBS 洗滌 3×3 分鐘。
7.滴加酶標二抗,室溫 1 小時。
8.PBS 洗滌 3×3 分鐘。
9.0.04%DAB+0.03 %H2O2顯色 5~10 分鐘。
10. 充分水洗后,復染、脫水、透明、封片、鏡檢。
3) 法(過氧化物酶抗過氧化物酶抗體復合物法)
1.標定固定后,PBS 洗滌。
2.1%H2O2(或 1%H2O2 甲醇)阻斷內源性過氧化物,室溫 10~20 分鐘。
3.PBS 洗滌 2×3 分鐘。
4.正常血清(二抗的正常血清)孵育,室溫 20 分鐘。
5.滴加一抗,室溫 1 小時或 4℃過夜。
6.PBS 洗滌 3×3 分鐘。
7.滴加二抗,室溫 30 分鐘。
8.PBS 洗滌 3×3 分鐘。
9.加 PAP 復合物,室溫 60 分鐘。
10. PBS 洗滌 3×3 分鐘。
11. 0.04%DAB+0.03% H2O2顯色 5~10 分鐘。
12. 充分水洗。13. 蘇木精復染,封片觀察。
4) 雙 法
1~10 同單 PAP 法。
11. 二次加酶標二抗。
12. PBS 洗。
13. 二次加 PAP。
14. PBS 洗。
15. 0.04%DAB+0.03 %H2O2顯色 5~10 分鐘。
16. 蘇木精復染核,封片,鏡檢。
3) 法(卵白素-生物素-過氧化物酶復合物法)
1~8 同 PAP 法
5)加 ABC 液,室溫 60 分鐘。
10) PBS 洗。
11) 0.04%DAB+0.03% H2O2顯色 5~10 分鐘。
12) 充分水洗。
13) 蘇木精復染核,封片,鏡檢。
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